Sobrevivência e desenvolvimento de Pseudomonas aeruginosa em água mineral experimentalmente contaminada / Survival and growth of Pseudomonas aeruginosain experimentally contaminated mineral water

Pseudomonas aeruginosa, agente patogênico oportunista, é frequentemente encontrado em águas minerais e pode causar infecções em indivíduos imunocomprometidos. Neste estudo foi avaliada a sobrevivência e/ou a multiplicação de P. aeruginosa em amostras de água mineral em embalagens plásticas de 1,5 L e 20 L, experimentalmente contaminadas, armazenadas a 35 ± 1ºC, 4 ± 2°C e em temperatura ambiente (20-25ºC), durante o período de validade do produto. Nas amostras de água mineral em garrafa plástica de 1,5 L, armazenadas a 35 ± 1ºC e 4 ± 2ºC, a população de P. aeruginosamanteve-se viável durante 370 e 100 dias, respectivamente. O maior aumento da população bacteriana ocorreu nas amostras de água mineral em galão de 20 L, armazenadas entre 20 a 25ºC, que passou de 3,8 para 6,6 log10 UFC/mL em um período de sete dias. Portanto, os galões de 20 L merecem atenção especial, pois além de serem retornáveis, normalmente são armazenados à temperatura ambiente. Os resultados reforçam a necessidade das empresas de águas minerais implantarem e implementarem as Boas Práticas de Fabricação (BPF) e o sistema Análise de Perigo e Pontos Críticos de Controle (APPCC) para eliminar ou minimizar os riscos do consumo deste produto. (AU)

Pseudomonas aeruginosa, an opportunistic pathogen, is often found in bottled waters and capable of infecting the immunocompromised patients. The present study aimed at evaluating the survival and/or the growth of P. aeruginosa strain in 1,5 L and 20 L bottled mineral water samples experimentally contaminated, stored at 35 ± 1°C, 4 ± 2°C, and at room temperature (from 20 to 25°C) during the product shelf-life period. In the mineral water samples contained in 1.5 L bottles, stored at 35 ± 1ºC and 4 ± 2ºC, P. aeruginosa remained viable for 370 and 100 days, respectively. The major increase in the bacterial population occurred in mineral water samples in 20 L bottles stored at 20 to 25ºC, being from 3.8 to 6.6 log10 CFU/mL, in a period of seven days. Therefore, the 20 L bottles deserve a special attention because, in addition of being returnable, they are usually stored at room temperature. The results reinforce the need of the mineral water companies in implementing the Good Manufacturing Practice (GMP) and the HACCP (Hazard Analysis Critical Control Point) to eliminate and to minimize the risks of consuming the contaminated product. (AU)

Sobrevivência e desenvolvimento de Pseudomonas aeruginosa em água mineral experimentalmente contaminada / Survival and growth of Pseudomonas aeruginosa in experimentally contaminated mineral water

Pseudomonas aeruginosa, agente patogênico oportunista, é frequentemente encontrado em águas minerais e pode causar infecções em indivíduos imunocomprometidos. Neste estudo foi avaliada a sobrevivência e/ou a multiplicação de P. aeruginosa em amostras de água mineral em embalagens plásticas de 1,5 L e 20 L, experimentalmente contaminadas, armazenadas a 35 ± 1ºC, 4 ± 2°C e em temperatura ambiente (20-25ºC), durante o período de validade do produto. Nas amostras de água mineral em garrafa plástica de 1,5 L, armazenadas a 35 ± 1ºC e 4 ± 2ºC, a população de P. aeruginosa manteve-se viável durante 370 e 100 dias, respectivamente. O maior aumento da população bacteriana ocorreu nas amostras de água mineral em galão de 20 L, armazenadas entre 20 a 25ºC, que passou de 3,8 para 6,6 log10 UFC/mL em um período de sete dias. Portanto, os galões de 20 L merecem atenção especial, pois além de serem retornáveis, normalmente são armazenados à temperatura ambiente. Os resultados reforçam a necessidade das empresas de águas minerais implantarem e implementarem as Boas Práticas de Fabricação (BPF) e o sistema Análise de Perigo e Pontos Críticos de Controle (APPCC) para eliminar ou minimizar os riscos do consumo deste produto.

Pseudomonas aeruginosa, an opportunistic pathogen, is often found in bottled waters and capable of infecting the immunocompromised patients. The present study aimed at evaluating the survival and/ or the growth of P. aeruginosa strain in 1,5 L and 20 L bottled mineral water samples experimentally contaminated, stored at 35 ± 1°C, 4 ± 2°C, and at room temperature (from 20 to 25°C) during the product shelf-life period. In the mineral water samples contained in 1.5 L bottles, stored at 35 ± 1ºC and 4 ± 2ºC, P. aeruginosa remained viable for 370 and 100 days, respectively. The major increase in the bacterial population occurred in mineral water samples in 20 L bottles stored at 20 to 25ºC, being from 3.8 to 6.6 log10 CFU/mL, in a period of seven days. Therefore, the 20 L bottles deserve a special attention because, in addition of being returnable, they are usually stored at room temperature. The results reinforce the need of the mineral water companies in implementing the Good Manufacturing Practice (GMP) and the HACCP (Hazard Analysis Critical Control Point) to eliminate and to minimize the risks of consuming the contaminated product.

PREVALENCE OF DRUG RESISTANCE AND VIRULENCE FEATURES IN Salmonella spp. ISOLATED FROM FOODS ASSOCIATED OR NOT WITH SALMONELLOSIS IN BRAZIL / Prevalência de resistência antimicrobiana e características de virulência em Salmonella spp. isoladas de alimentos associados ou não com salmonelose no Brasil

Salmonella is the most common etiological agent of cases and outbreaks of foodborne diarrheal illnesses. The emergence and spread of Salmonella spp., which has become multi-drug resistant and potentially more pathogenic, have increased the concern with this pathogen. In this study, 237 Salmonella spp., associated or not with foodborne salmonellosis in Brazil, belonging mainly to serotype Enteritidis, were tested for antimicrobial susceptibility and the presence of the virulence genes spvC, invA, sefA and pefA. Of the isolates, 46.8% were sensitive to all antimicrobials and 51.9% were resistant to at least one antimicrobial agent. Resistance to more than one antimicrobial agent was observed in 10.5% of the strains. The highest rates of resistance were observed for streptomycin (35.9%) and nalidixic acid (16.9%). No strain was resistant to cefoxitin, cephalothin, cefotaxime, amikacin, ciprofloxacin and imipenem. The invA gene was detected in all strains. Genes spvC and pefA were found in 48.1% and 44.3% of strains, respectively. The gene sefA was detected in 31.6% of the strains and only among S. Enteritidis. Resistance and virulence determinants were detected in Salmonella strains belonging to several serotypes. The high rates of antibiotic-resistance in strains isolated from poultry products demonstrate the potential risk associated with the consumption of these products and the need to ensure good food hygiene practices from farm to table to reduce the spread of pathogens relevant to public health.

Salmonella é o agente etiológico mais comumente envolvido em casos e surtos de doenças diarréicas de origem alimentar. A preocupação com este patógeno é, ainda, maior quando se verifica o surgimento e a disseminação de cepas multirresistentes e potencialmente mais patogênicas. Neste estudo, 237 cepas Salmonella spp., associadas ou não com casos ou surtos de salmonelose e pertencentes, principalmente, ao sorovar Enteritidis, foram avaliadas quanto ao perfil de susceptibilidade antimicrobiana e presença dos genes de virulência spvC, invA, sefA e pefA. Entre as cepas avaliadas, 46,8% foram sensíveis a todos os agentes antimicrobianos e 51,9% foram resistentes a pelo menos uma droga. Multirresistência foi observada em 10,5% das cepas. As maiores taxas de resistência foram observadas para estreptomicina (35,9%) e ácido nalidíxico (16,9%). Não foram detectadas cepas resistentes à cefoxitina, cefalotina, cefotaxima, amicacina, ciprofloxaxina e imipenem. O gene invA foi detectado em todas as cepas de Salmonella. Os genes spvC e pefA foram encontrados em 48,1% e 44,3% das cepas, respectivamente. O gene sefA foi detectado em 31,6% das cepas, estando presente somente entre as cepas de S. Enteritidis. Resistência antimicrobiana e marcadores de virulência foram detectados em cepas de Salmonella pertencentes a diversos sorovares. A alta taxa de resistência antimicrobiana verificada em cepas isoladas de frangos e derivados demonstra o potencial risco associado ao consumo destes produtos e a necessidade de se assegurar boas práticas de higiene em toda cadeia produtiva para reduzir a disseminação de patógenos relevantes para a saúde pública.

Caracterização fenotípica e genotípica de Listeria monocytogenes isoladas de produtos cárneos crus comercializados no município de São Pau / Genotypic and phenotypic characterization of Listeria monocytogenes isolated from refrigerated meat products marketed in the city of São Paulo

Listeria monocytogenes é um importante patógeno de origem alimentar que causa listeriose, infecção severa que acomete, principalmente, gestantes, idosos, crianças e imunocomprometidos, e que apresenta elevada taxa de mortalidade. A bactéria está amplamente distribuída no ambiente e é comumente encontrada em produtos cárneos. O presente estudo teve como objetivos caracterizar 439 isolados de L. monocytogenes obtidos de salsicha bovina e produtos cárneos crus (carne moída, linguiça suína e coxa de frango) refrigerados, adquiridos no comércio do município de São Paulo, e previamente submetidos à sorotipagem molecular. Os isolados foram caracterizados quanto ao perfil de susceptibilidade antimicrobiana; presença dos genes de virulência actA, inlA, inlC, inlJ, prfA, iap, hly, plcA, plcB e mpl; perfil genético por eletroforese em campo pulsado (PFGE) e sequenciamento parcial dos genes actA e lmo0737. Baixa frequência de resistência antimicrobiana (0,5%) foi observada entre os 416 isolados avaliados. Um isolado pertencente ao sorogrupo 1 apresentou resistência à penicilina e à clindamicina e outro identificado como 4a ou 4c apresentou resistência à tetraciclina. Todos os isolados foram positivos para os genes de virulência testados. O sequenciamento parcial do gene actA mostrou a ocorrência de 14 sequências de nucleotídeos distintas nos 97 isolados avaliados. Além disso, verificou-se a ocorrência de uma deleção de 35 aminoácidos no gene actA em 36 isolados, além de substituições de nucleotídeos que resultaram em mutações nas sequências de aminoácidos da grande maioria dos isolados. A análise filogenética do gene actA possibilitou o agrupamento dos isolados em duas linhagens distintas (I e II). Os resultados do PFGE indicaram grande variabilidade nos perfis genéticos dos isolados analisados, principalmente naqueles pertencentes aos grupos 2 (1/2c e 3c), 3 (1/2b e 3b) e 4 (4b, 4d e 4e). Os resultados deste estudo mostram que os isolados de L. monocytogenes provenientes de salsicha bovina e produtos cárneos crus comercializados no município de São Paulo, apresentam grande diversidade genética, importante potencial de virulência e baixa frequência de resistência antimicrobiana. A diversidade observada deve-se, provavelmente, à característica ubíqua deste micro-organismo, tornando-o mais susceptível a grande pressão seletiva do ambiente

Listeria monocytogenes is an important foodborne pathogen that causes listeriosis, a severe infection that affects primarily pregnant women, elderly, children and imunocompromised individuals, and has a high mortality rate. The bacteria is widely distributed in the environment and commonly found in meat products. The present study aimed to characterize 439 isolates of L. monocytogenes obtained from pork sausage and raw chilled meat products (ground beef, beef sausage, and chicken thigh) purchased in supermarkets in the city of São Paulo, and previously submitted to molecular serotyping. The isolates were characterized for antimicrobial susceptibility profile; presence of virulence genes actA, inlA, inlC, inlJ, prfA, iap, hly, plcA, plcB and mpl; genetic profile by pulsed field gel electrophoresis (PFGE) and partial sequencing of genes actA and lmo0737. A low frequency of antimicrobial resistance (0.5%) was observed among the 416 evaluated isolates. One isolate belonging to serogroup 1 presented resistance to clindamycin and penicillin and another one identified as 4a or 4c was resistant to tetracycline. All isolates were positive for the tested virulence genes. The partial sequencing of the gene actA indicated the occurrence of 14 distinct nucleotide sequences in the 97 isolates tested. Furthermore, a deletion of 35 amino acids in the actA gene was detected in 36 isolates, and nucleotide substitutions that resulted in amino acid changes in the sequences of most isolates. Phylogenetic analysis of the actA gene clustered the isolates in two distinct lineages (I and II). Results of PFGE indicated a great genetic variability among isolates, especially among those belonging to groups 2 (1/2c and 3c), 3 (1/2b and 3b) and 4 (4b, 4d and 4e). The results of this study show that isolates of L. monocytogenes from pork sausage and raw meat products marketed in the city of São Paulo present a great genetic diversity, significant virulence potential and low frequency of antimicrobial resistance. The detected diversity is probably due the ubiquitous nature of these microorganisms, making them more susceptible to selective pressure of the environment

Prevalence and antimicrobial susceptibility profile of Enterococcus spp isolated from frozen chicken carcasses

Prevalence and antimicrobial susceptibility of Enterococcus spp. were evaluated in 360 frozen unse asoned chicken carcasses samples collected from September 2004 to June 2006 from the retail stores in São Paulo State, Brazil. Enterococcus spp. was isolated from all analyzed samples, and 1,332 strains were identified from them. Among the ten identified species, the predominance of E. faecalis, E. gallinarum, E.casseliflavus and E. faecium was occurred. All of the Enterococci strains showed some degree of resistanceto the nine antimicrobials utilized in the study. The percentages of antimicrobial resistance were: 89.2% for tetracycline, 91.4% for quinupristin-dalfopristin, 83.5% for erythromycin, 65% for ciprofloxacin, 55.4% for chloramphenicol, 6.5% for linezolid, 2.3% for vancomycin, 2.3% for teicoplanin and 0.2% for ampicillin. The occurrence of the high level resistance to amyno glicosides (HLR-A) was detected in 57.4% of the isolates. E. faecalis and E. faecium species, which are considered as important agents in nosocomial infections, showed resistance to eight and seven antibiotics, respectively.

Ocorrência de Cronobacter spp. (Enterobacter sakazakii) em alimentos infantis adquiridos em um hospital público / Occurrence of Cronobacter spp. (Enterobacter sakazakii) in infant food purchased in a public hospital

Cronobater spp. (E. sakazakii) é considerada um micro-organismo oportunista que vem ganhando atenção de autoridades de Saúde Pública, pelo crescente número de surtos de infecção em recém–nascidos e lactentes. A bactéria está associada a casos raros, com alta taxa de mortalidade, podendo causar meningites, enterocolite necrosante e septicemia. Cronobacter spp. tem ampla disseminação, porém apenas as fórmulas lácteas infantis em pó foram, epidemiologicamente, associadas às doenças causadas por esse agente. No presente estudo foi avaliada a ocorrência de Cronobacter spp. em alimentos destinados às crianças de 0-36 meses de idade, adquiridos em lactário de um hospital público do município de São Paulo. Vinte e seis amostras de fórmulas reconstituídas e 24 produtos em pó foram analisados segundo a metodologia da ISO. Cronobacter spp. foi detectada em uma amostra (3,8 por cento) reconstituída de alimento infantil à base de farinha de milho e em quatro desse produto em pó (16,7 por cento). A bactéria não foi detectada nas fórmulas infantis destinadas às crianças de 0-6 meses, contudo sua presença em outros alimentos infantis pode contribuir para a contaminação do ambiente e dos utensílios dos lactários por meio da contaminação cruzada.

Botulism in Brazil, 2000-2008: epidemiology, clinical findings and laboratorial diagnosis / Botulismo no Brasil, 2000-2008: epidemiologia, achados clínicos e diagnóstico laboratorial

Botulism is a rare and potentially lethal illness caused by Clostridium botulinum neurotoxin. We describe the findings of a laboratorial investigation of 117 suspected cases of botulism reported to the surveillance system in Brazil from January 2000 to October 2008. Data on the number and type of samples analyzed, type of toxins identified, reporting of the number of botulism cases and transmission sources are discussed. A total of 193 clinical samples and 81 food samples were analyzed for detection and identification of the botulism neurotoxin. Among the clinical samples, 22 (11.4 percent) presented the toxin (nine type A, five type AB and eight with an unidentified type); in food samples, eight (9.9 percent) were positive for the toxin (five type A, one type AB and two with an unidentified type). Of the 38 cases of suspected botulism in Brazil, 27 were confirmed by a mouse bioassay. Laboratorial botulism diagnosis is an important procedure to elucidate cases, especially food-borne botulism, to confirm clinical diagnosis and to identify toxins in food, helping sanitary control measures.

Botulismo é uma doença rara e potencialmente letal, resultante da ação de uma neurotoxina produzida pelo Clostridium botulinum. No presente estudo, estão descritos os resultados da investigação laboratorial de 117 casos suspeitos de botulismo notificados ao sistema de vigilância, ocorridos no Brasil no período de janeiro de 2000 a outubro de 2008. Os dados obtidos sobre as fontes de transmissão, os tipos de toxina identificados e de amostras analisadas serão discutidos. Foram analisadas 193 amostras clínicas e 81 amostras de alimentos para detecção e identificação de neurotoxina botulínica. Entre as amostras clínicas, 22 (11,4 por cento) amostras apresentaram resultado positivo para toxina (nove do tipo A, cinco do tipo AB e em oito o tipo não foi identificado) e entre as amostras de alimentos, oito (9,9 por cento) foram positivas (cinco do tipo A, uma do tipo AB e em duas o tipo não foi identificado). Dos 38 casos considerados positivos para botulismo, 27 foram confirmados pelo bioensaio em camundongo. O diagnóstico laboratorial de botulismo é importante para elucidação dos casos, principalmente de botulismo alimentar, para confirmação dos diagnósticos clínicos e identificação das toxinas nos alimentos, provendo subsídios para as medidas de controle sanitário.

Pesquisa de bacteriófagos em água suspeita de contaminação por vírus da hepatite A / Study of bacteriophages in water suspected of contamination by hepatitis A virus

Os vírus entéricos, quando presentes no trato gastrointestinal de indivíduos infectados, são eliminados pelas fezes em grandes quantidades podendo contaminar, direta ou indiretamente, as águas destinadas ao consumo humano. O ser humano é o único hospedeiro natural do vírus da hepatite A. A detecção de colifago e de fago de Shigella sonnei em água pode ser indicativa da presença destes vírus. No presente estudo foi realizado o diagnóstico laboratorial presuntivo de um surto de hepatite A, pela pesquisa de bacteriófagos, em uma amostra de água de poço e o estudo da sobrevivência dos fagos de S. sonnei em água. A análise revelou resultado positivo para fagos de Shigella e negativo para colifagos. Quanto aos ensaios de sobrevivência, a presença dos fagos de S. sonnei foi detectada na água do poço naturalmente contaminada até o nono dia de conservação em temperatura ambiente.

The enteric viruses are present in the gastrointestinal tract of infected individuals, being eliminated in feces in large quantities and can directly or indirectly contaminate water intended for human consumption. Humans are the only natural hosts for hepatitis A. Detection of coliphages and phage of Shigella sonnei in water may indicate the presence of these viruses. In the present study was done the presumptive laboratory diagnosis of an outbreak of hepatitis A through search of bacteriophages in a sample of well water and the study of survival of shigelafagos in water. The analysis revealed positive for phages of S. sonnei and negative for coliphages. For the tests of survival, the presence of phages of S. sonnei was detected in naturally contaminated well water until the ninth day of storage at room temperature.

Detecção de Vibrio cholerae O1 em ostras utizando anticorpo monoclonal em ensaio de aglutinação / Use of monoclonal antibody for detecting Vibrio cholerae O1 in oysters by means of agglutination test

O V. cholerae sorogrupo O1 é o agente etiológico da cólera pandêmica, sendo considerado dentre os víbrios patogênicos ao homem, o mais importante. Os sintomas das infecções por esta bactéria variam de diarréia branda a doença grave podendo até levar a óbito. Dentre os alimentos marinhos, as ostras representam uma das principais vias na transmissão de cólera. Os métodos convencionais para detecção do V. cholerae O1 são laboriosos e demorados havendo, portando, a necessidade de implantar métodos rápidos, sensíveis, específicos, simples e de baixo custo. O objetivo deste estudo foi avaliar a técnica de aglutinação de partículas de látex sensibilizadas com anticorpo monoclonal (AcMo) na detecção de V. cholerae O1 em ostras, contaminadas laboratorialmente. A técnica de aglutinação com látex sensibilizado detectou 1,2x102 UFC da bactéria (diluição 1/32). As amostras de ostras utilizadas para contaminação originalmente não continham V. cholerae, mas outras bactérias foram detectadas, tais como: Proteus mirabilis, Pseudomonas spp. e outros víbrios. O presente estudo demonstrou que a detecção de V. cholerae em alimentos foi reduzida para 18 horas, considerando que pela metodologia convencional a análise é finalizada, em média, em 7 dias. O AcMo produzido apresentou uma sensibilidade eespecificidade de 100% para V. cholerae.